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现代预防医学MODERN PREVENTIVE MEDICINE
2000 Vol.27 No.1 P.88-90
肌苷苦味酸速率测定方法学探讨
顾华强 熊玮平
［摘要］ 目的：从反应原理、反应历程研究不同干扰物对肌苷(Cr)苦味酸(P)速率测定的干扰，并作定量描述。方法：监测各干扰物与P的反应历程曲线，分别检测各系列浓度干扰物对纯Cr、血清Cr的干扰。结果：葡萄糖、丙酮、α-酮戊二酸、抗坏血酸、头孢唑林钠、多巴胺、血红蛋白在病理、用药浓度、最大干扰值分别为8.7%、18.4%、53%、103%、20%、11%、－24%。高浓度P与NaOH试剂，延迟时间20秒，测定时间(20～40)秒可基本消除生理浓度快反应干扰物的影响。同步反应干扰物的影响可询问病情、避开药物残留期、血清加标回收的办法予以消除。
［关键词］ 肌苷；速率法；干扰物
［中图 ［文章编号］ 1003-8507(2000)01-0088-03
AN EXPLORATION ON THE
METHODOLOGY OF KINETIC SERUM CREATININE DETERMINATION
GU Hua-qiang XIONG Wei-ping
（The Forth University Hospital,West China University of Medical Science,Chengdu
610041,P.R.China）
Abstract:Objective:The studies for the mechanism
and the course of the interference to kinetic serum creatinine measurement were done to
quatitative describe.Method:We continuous monitor the reaction�s course of the
interference substances with the alkaline picrate,the value of the interference to the
pure creatinine and the serum creatinine were independently determined.Result:In some
mobid、drug concentration,the largest interference value of glucose、acetone、α-ketoglutaric、ascorbic
acid、cefazoline sodium、dopmine、hemoglobin were 8.7%、18.4%、53%、103%、20%、11%、－24%.The
interference caused by the fast reaction substances at physiological concentration can be
eliminated by the high concentration of picrate and NaOH reagent,and the use of 20 seconds
of delay time and (20～40) seconds of measuring time.For the interference of the
synchronous reaction substances,we may inquire the patient�s situation,avoid the drugs
residual period,or standard addition method to decrease the interference.
Key words:Creatinine;Kinetic;Interference
肌苷(Cr)苦味酸(P)速率测定是目前临床检验普遍采用的方法。但该法受血清中许多物质干扰，易产生偏差［1］。为此我们从反应原理、反应历程对丙酮(Ace)、α-酮戊二酸(α-kg)、葡萄糖(Glu)、尿酸(UA)、抗坏血酸(Vc)、头孢唑林钠(Cefa)、多巴胺(Dopa)、血红蛋白(Hb)、总蛋白(Tp)对测定的干扰进行方法学探讨，作出定量描述，并提出排除干扰的方法，介绍如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 干扰物 Ace,成都化学试剂厂。α-kg，上海试剂三厂。Pya、UA、Vc标准液，北京中生公司；Dopa、Cefa，上海四药股份有限公司。Tp标准液，上海生研所。Hb标准，自制。
1.1.2 试剂 采用北京中生、保定长城、上海复旦张江、上海长征四公司试剂盒。
1.1.3 仪器 意大利产EOS880半自动生化分析仪。
1.2 方法
1.2.1 反应历程监测 100ulCr标准或干扰物(生理浓度、高浓度)见表1。分别加入1000ul碱性苦味酸试剂(中生试剂)，立即用EOS880半自动生化反析仪从(0～150)秒连续监测每秒吸光度变化，记录不同物质与试剂反应的历程曲线。
表1 反应历程监测物质浓度
Cr
umol/L
Vc
g/L
Pya
umol/L
Acem
g/L
Glu
mg/L
α-kg
mg/L
Hb
mg/L
UA
umol/L
Tp
g/L
Cefa
g/L
Dopa
g/L
生理浓度
82.9
500
50
123.3
1000
122.5
1.3
279
50
―
―
高浓度
110.5
1000
100
492
4000
250
―
―
―
6.25
0.625
1.2.2 干扰实验 各干扰物与纯Cr干扰实验，用中生试剂。各干扰物与人血清Cr干扰实验，用四公司试剂。各干扰物系列最终加入浓度见表2，各试剂盒成份及测定参数见表3。测得干扰样品值C干扰，基础样品值C基础。2 结果
2.1 方法1.2.1所得各反应历程曲线，生理浓度见图1，高浓度见图2。
2.2 以方法1.2.2各浓度干扰物C干扰与C基础的百分比作为纵坐标干扰物浓度为横坐标，作出每种干扰物与纯Cr干扰曲线见图3与血清Cr干扰曲线见图4。［2］
表2 干扰物系列最终加入浓度
干扰物
1
2
3
4
α-kg(mg/L)
300
150
75
37.5
Vc(mg/L)
1000
500
250
125
Glu(mg/L)
4000
2000
1000
500
Ace(mg/L)
500
250
125
62.5
Hb(g/L)
5.5
2.75
1.40
0.70
Cefa(g/L)
20
10
5
2.5
Dopa(g/L)
1.25
0.63
0.31
0.16
3 讨论 1976年，Vasiliades［3］认为Cr与P反应生成复合物(PCr)有两个平衡：(1)P＋OH－POH�，(2)POH*＋(*表示活化)，反应速率由第二步决定，Rate=k1［POH*］［Cr］-k2［PCr］［OH－］x亦可表示为dA/dt=Kobs［Cr］,(Kobs为表观速率常数)。不同干扰物与碱性苦味酸反应的Kobs不同。Martin
H［4］认为P与Cr(或其它酮类)生成羰基平面电荷转移的空间结构，假Cr类与P反应的共有基团是羰基，羰基相邻位是―CH3、―CH2―、N的化合物空间位阻小，使Kobs增大，而相邻位是苯基、环烃基则空间位阻大，Kobs减少。从分子结构上邻位是N、―CH3、―CH2―，因此都能以不同Kobs与碱性苦味酸反应生成类似PCr的有色产物。Vc、Glu、UA、Dopa均有数量不同的还原性羟基，能将苦味酸还原为苦味酸盐呈色，而产生干扰，属于还原类干扰物［5］。其中Cr、Cefa、α-kg、Vc有较大的Kobs，而其它干扰物的Kobs较小，致反应速率按一定顺序排列，见图1。Pya、Ace、Glu、UA、Hb(生理浓度)在前20秒吸光度增加很快。(20～40)秒ΔA／s增加减缓，以后增加更慢，反应趋于平衡，可将此类干扰物称为快反应干扰物。Cefa、α-kg、Vc具有接近甚至高于Cr反应速率，且在150秒内ΔA/s持续以较大速率增高，可称为同步反应干扰物。图2表明各种干扰物在高浓度时有类似生理浓度的反应速率排序，即浓度改变使反应速率增大，但不影响Kobs。
图1 干扰物与试剂反应面历程曲线(生理浓度)
图2 干扰物与试剂反应面历程曲线(高浓度)
图3 干扰曲线图(干扰物与肌苷标准)
图4 干扰曲线图(干扰物与血清)
图3表明单一干扰物影响纯Cr与P的反应，干扰随浓度增大。Glu、Pya、Ace、Hb干扰小，在生理浓度可忽略。在较高病理浓度Ace500mg/L、Glu2000mg/L时干扰值分别为21%、5.2%，α-kg100mg/L时干扰值为48%，Vc1000mg/L时干扰值为46%。
正常血清存在多种干扰物，其中一种浓度异常增高仍表观为综合性干扰结果。在病理或用药情况下，Glu、Ace、α-kg、Vc、Cefa、Dopa、Hb浓度为2000mg/L、500mg/L、100mg/L、1000mg/L、4g/L、0.5g/L、4g/L时最大干扰值分别为8.7%、18.4%、53%、103%、20%、11%、－24%，见图4，必须设法扣除病理干扰值。
实验说明，不同试剂产生的干扰值不同，中生、保定试剂P浓度大，测定时间短，除α-kg外其它干扰物引起的干扰值均小于试剂浓度低、测定时间长的张江、长征试剂盒。因此用较高浓度的P与NaOH试剂能有效保持反应为假一级反应，延迟时间20秒，测定时间(20～40)秒，可基本消除生理浓度快反应干扰物Pya、Ace、Glu、UA、Hb的干扰。同步反应干扰物Cefa、α-kg、Vc则难以从延迟时间上清除，可采用询问病情、避开药物残留期检测，或血清中加入Cr标准，计算回收率，扣除干扰值的办法减少干扰。对于多巴胺，用(20～40)秒测定时间，可基本消除其产生的干扰。
［作者简介］顾华强(1955―)，男，副主任检验师，检验科主任，任本科生教学.
［作者单位］顾华强（华西医科大学第四附属医院，成都610041）
熊玮平（华西医科大学第四附属医院，成都610041）
参考文献
［1］Bowers LD.Kinetic serum creatinine
assays.Ⅰ.The role of various factors in determining specificity［J］.Clin
Chem,1980,26:551-554．
［2］Glick MR,Ryder KW,Jackson SA.Graphical comparision of interferences in clinical
chemistry instrumentation［J］.Clin Chem,1986,32:470-475．
［3］Vasiliades J.Reaction of Alkaline sodium picrate with creatinine:Ⅰ.Kinetics and
Mechanism of Formation of the Mono-Greatinine Picric Acid Complex［J］.Clin
Chem,1976,22(10):1664-1671．
［4］Kroll MH,Roach NA.Mechanism of interference with the jaffe reaction for creatinine［J］.Clin
Chem,1987,33(7):1129-1132．
［5］Bowers LD and Wong ET.Kinetic serum creatinine assays.Ⅱ.A critical evatuation and
review［J］.Clin Chem,1980,26(5):555-561．
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